L-homocystein, Hcy, L-2-amino-4-merkaptomáselná kyselina, 2-amino-4-merkaptomáselná kyselina,
2-amino-4-merkaptobutanová kyselina

(2S)-2-amino-4-sulfanylbutanová kyselina

Homocystein se vyskytuje v redukované a oxidované formě, nebo je vázaný na bílkoviny. Tento problém byl vyřešen převedením veškerého homocysteinu na redukovanou formu. Plazma nebo sérum se upraví pomocí dithioerythritolu, dithiothreitolu, merkaptoetanolu, tributylfosfinu nebo tris(2-karboxyetyl)fosfinu.
Doporučuje se odběr nalačno, protože po požití bílkovin jsou hodnoty zvýšené. Koncentrace homocysteinu
v plazmě se měří buď nalačno nebo po podání methioninu. Koncentrace homocysteinu po jídle stoupá
a graduje po 6 h podle množství methioninu v potravě. Doprava na ledu. Maximální čas od získání do zpracování vzorku je 4 h. Ihned centrifugovat (4000 ot/min, 15 min), pokud není analyzováno v den odběru, zmrazit. Opakované zamrazení nevadí. Pokud se nezabrání glykolýze může být naměřená koncentrace až dvojnásobek skutečné hodnoty, protože methionin se převede na homocystein.
Stanovení se provádí v plazmě s antikoagulanty: heparin + NaF, K₂EDTA + NaF nebo K₂EDTA a kyselina citrónová (stabilita 48 h). Je možné také přidat specifické inhibitory S adenosylhomocysteinhydrolázy, které zabrání glykolýze. Stanovení se provádí také v séru, případně v moči.
Stabilita vzorku 20 – 25 °C (plazma) 6 h, (sérum) 4 dny; 4 – 8 °C (plazma, sérum) 4 týdny; 20 °C (plazma)
2 roky, (sérum) 4 roky; nicméně pro dlouhodobé zamrazení se doporučuje -70 °C. Hemolýza stanovení neruší.

Používají se imunochemické (FIA, FPIA) nebo chromatografické (analyzátor aminokyselin, HPLC s UV, fluorescenční nebo elektrochemickou detekcí, kapilární elektroforéza s fluorescenční detekcí, GC-MS a LC
s elektrosprejovou tandemovou MS) postupy. GC-MS je považována za zlatý standard.

Analyzátor aminokyselin se používá po deproteinaci plazmy nebo séra. Aminokyseliny jsou separovány iontově-výměnnou chromatografií a detekovány reakcí s ninhydrinem (modré zbarvení). Dnes se používá málo, protože přístroj je drahý a pomalý (separace trvá 1 h i déle).

Redukce homocystinu, smíšeného disulfidu a forem homocysteinu vázaných na bílkoviny v séru nebo plazmě na volný homocystein se provádí NaBH₄ s následnou derivatizací monobrombimanem, separaci HPLC
a fluorescenční detekcí. Jiná metoda HPLC se stejnou detekcí používá k redukci tri-n-butylfosfin, pak následuje vysrážení bílkovin a alkalizace supernatantu boritanem sodným, derivatizace 7-fluor-2-oxa-1,3-diazol-
4-sulfonátem, přidání 8-aminonaftalen-1,3,6-trisulfonové kyseliny jako vnitřního standardu a konečně separace s detekcí. HPLC metody jsou časově náročné a výsledky nejsou dostatečně spolehlivé. Metoda je lineární
v intervalu 5 – 740 µmol/l. Průměrná výtěžnost je 101,2 %, preciznost v sérii CV 2,8 – 8,3 %, mezi sériemi 6,9 – 11,0 %.
Metoda GC-MS používá redukce dithiothreitolem a dosahuje podobných výsledků jako HPLC. Preciznost v sérii CV < 3,5 %, mezi sériemi < 4,8 %.

Vysoce účinná kapilární elektroforéza (HPCE) s využitím fluorescenční detekce indukované laserem umožňuje stanovit homocystein od 10 nmol/l, přičemž preciznost CV v sérii i mezi sériemi je < 1 %.

Pro detekci FPIA se používá následující příprava: homocystin, smíšený disulfid a formy homocysteinu vázané na bílkoviny v séru nebo plazmě jsou redukovány dithiothreitolem na volný homocystein, který je převeden
S-adenosylhomocystein hydrolázou v přebytku adenosinu na S-adenosylhomocystein. Tento produkt soutěží
o vazebná místa na monoklonální protilátce s S-adenosylhomocystein–fluoresceinem.Množství volného konjugátu se stanoví polarizační fluorescencí. Metoda je jednoduchá a snadno automatizovatelná. Linearita metody je do 50 µmol/l, výtěžnost 96,8 – 103,2 %, preciznost v sérii CV 2,3 – 3,5 %, mezi sériemi 2,3 – 3,8 %.
Další fluorescenční metoda po redukci homocysteinu vázaného na bílkoviny převede volný homocystein homocysteinázou na sirovodík, amoniak a 2-oxobutyrát. Sirovodík reaguje s vhodným fluoroforem na
3,7-bis(dibutylamino)fenothiazin-5-ium chlorid, který po excitaci při 665 nm emituje fluorescenci 690 nm. Metoda má limit stanovitelnosti 1 µmol/l, preciznost v sérii CV 3,5 – 4,3 %, mezi sériemi 3,7 – 9,4 %.

Referenční metoda není dostupná.
Toleranční rozpětí v EKK je 30 %.

Výsledky stanovení homocysteinu snižují: těhotenství (30 až 50 %) aj.
Výsledky stanovení homocysteinu zvyšují: cyklosporin, etanol, fenytoin, kortikosteroidy, metotrexát, menopauza, niacin (až +55 %), poloha vstoje (+9 %), trimethoprim aj.