normetanephrine, normetadrenalin;

α-(aminomethyl)-4-hydroxy-3-methoxybenzenmethanol, α-(aminomethyl)-4-hydroxy-3-methoxybenzylalkohol, 4-(2-amino-1-hydroxyethyl)-2-methoxyfenol 

Stanovení se provádí v séru nebo moči. Sérum (plazma) je stabilní při 25 °C 2 – 24 h, při 4 °C 2d, při -20 °C 1 – 6 měsíců. Před odběrem dieta (vyloučit sýry, banány), 4 h nejíst a nepít, 30 min. ležet se zavedeným žilním katétrem. Jako antikoagulans použít heparin nebo EDTA, jako antioxidant glutation. Krev transportovat v chladu. Moč uchováváme při laboratorní teplotě 24 h, při 4 – 8 °C ve tmě v plastové nádobě stabilita 14 d, po okyselení na pH 2 – 3 při -25 °C dlouhodobě.

Fotometrie nerozlišuje metanefrin a normetanefrin. Po kyselé hydrolýze se nekonjugované metanefriny adsorbují na katexovou pryskyřici, eluují NH₄OH a převedou na žlutý vanilin oxidací jodistanem. Vzniklá látka se stanovuje fotometricky při 360 nm. Při metodě interferují kontrastní barviva pro rtg, fenoxykyseliny a některé léky (např. propranolol). Metoda je zdlouhavá a pracná.

Fluorimetrie je citlivější a specifičtější než fotometrie. Je založena na chemické oxidaci a tautomerizaci na jejich trihydroxyindolové deriváty. Před oxidací se moč hydrolyzuje a částečně purifikuje katexovou chromatografií. Metanefrin a normetanefrin  lze oddělit purifikací při rozdílném pH. Metoda je pracná. Excitace 405 – 422 nm, emise 510 – 531 nm.

RIA používá při kompetitivních reakcích heterogenní konjugáty, kdy je ¹²⁵I značený oktopamin (p-hydroxyfenylethanolamin) nebo synefrin, tj. 4-[1-hydroxy-2-(methylamino)ethyl]fenol. Jodace metanefrinu a normetanefrinu není možná. Detekční limit je 30 ng/l. Mohou se také použít acetylované deriváty metanefrinu a normetanefrinu (proteinová matrice se před imunoreakcí odstraní precipitačním činidlem) Po imunoreakci se imunokomplex vysráží druhou protilátkou v polyetylenglykolu, odstředí a po dekantaci se měří radioaktivita sraženiny. Rozsah metody 48 – 4800 ng/l normetanefrinu, mez detekce 24 ng/l.

ELISA začíná hydrolýzou s HCl 30 min při 90 °C. Po ochlazení se přidá acylační pufr a nechá se působit 15 min za laboratorní teploty. Takto upravený a naředěný vzorek se pipetuje do jamky spolu s králičím antisérem vůči normetanefrinu a inkubuje se 30 min (třepání) za laboratorní teploty. Po trojnásobném promytí se přidá protilátka vůči králičímu IgG s peroxidázou a inkubuje se 15 min (třepání) za laboratorní teploty. Po trojnásobném promytí se přidá tetrametylbenzidin a inkubuje se 15 min (třepání) za laboratorní teploty ve tmě. Po přidání stop činidla (0,25 M H₂SO₄) se absorbance odečítá do 10 min při 450/620-650 nm. Naměřený signál je nepřímo úměrný koncentraci normetanefrinu. Rozsah šestibodové kalibrace 23 – 3000 µg/l. Mez detekce 23 µg/l. Křížová reakce: noradrenalin 0,64 %, ostatní < 0,2 %. Preciznost v sérii 17,2 – 17,8 %, mezi sériemi 19,3 – 21,4 %. Linearita ředění 93 %, zpětný výtěžek 90 – 113 %.

GC stanovuje částečně purifikované metanefriny (na koloně nebo extrakcí), které jsou pak oxidovány jodistanem na vanilin. Vanilin je extrahován a přeměněn na těkavý silylderivát reakcí N,O- bis(trimetylsilyl)acetamidem. Derivatizované látky se rozdělí na 3 % OV-1 koloně a vanilinové deriváty se stanoví plameno-ionizačním detektorem. Lze také připravit trifluoracetylderiváty metanefrinu a normetanefrinu, rozdělit je na 3 % QF-1:2% XF-1105 koloně a stanovit detektorem elektronového záchytu nebo hmotnostním spektrometrem.

HPLC v izokratickém režimu s elektrochemickou detekcí (potenciál 780 – 840 mV) je určena ke stanovení metanefrinu, normetanefrinu a 3-methoxytyraminu v moči. Vázané metanefriny se uvolní kyselou hydrolýzou (2 M HCl). Po naředění neutralizačním pufrem se nastaví pH vhodné pro následnou extrakci do pevné fáze (2 M NaOH). Po vymytí elučním pufrem se přidá před chromatografií kyselina octová. Metoda je použitelná v rozsahu 5 – 5000 µg/l. HPLC trvá 14 min (průtok 1,2 ml/min, teplota 25 °C). Preciznost v sérii je < 4 %, mezi sériemi < 6 %; zpětný výtěžek přibližně 85 %.

LC-MS/MS předchází extrakce do pevné fáze, kterou lze provádět současně u všech šesti analytů. Kapalinová chromatografie trvá 4 min a umožňuje stanovit adrenalin, noradrenalin, dopamin, metanefrin, normetanefrin a 3-methoxytyramin. Jako vnitřní standardy se používají dopamin-D4, noradrenalin-D6, adrenalin-D6, 3-methoxytyramin-D4, normetanefrin-D3, metanefrin-D3 (rozpuštěné v matrici čisté moče). Po kyselé hydrolýze vznikají při extrakci difenylboronátové komplexy, které se snadno zachycují na extrakční koloně C18, v alkalickém prostředí se snadno rozrušují a metanefriny se promývají metanolem s pufrem NH₄Cl-NH₄OH a eluují 5 % kyselinou mravenčí. Chromatografie při 40 °C na pentafluorfenylové koloně (zrno 3 µm) s mobilní fází 0,2 % vodní kyselina mravenčí s metanolem. Hmotnostní spektrometrie používá teplotu plynu 325 °C při napětí v kapiláře 3000 V; sledují se normetanefrin m/z 166,1 a fragmenty 134 a 106,1 spolu s vnitřním standardem normetanefrinem-D3 m/z 169,1 a jeho fragmentem 137,1. Kalibrace pro normetanefrin je 0 – 3000 µg/l. Preciznost v sérii 0,2 – 1,5 %, mezi sériemi 0,2 – 3,2 %; zpětný výtěžek 100,1 – 102,0 %.

Hodnoty snižuje: deficit nebo farmakologická inhibice monoaminooxidázy, metylglukamin (v moči).

Hodnoty zvyšuje: odběr ve stoje nebo vsedě (3x vyšší hodnoty oproti odběru vleže), tělesná námaha, hladovění (hypoglykémie), ztráta krve (hypovolemie), mentální stres; léky (v moči): alfa₂agonisté, amfetamin, antihypertenziva, blokátory Ca kanálu, bromokriptin, buspiron, klonidin, dexametazon, diuretika, dopamin, etanol, fenotiaziny, hydraziny, chlorpromazin, izoproterenol, kofein, levodopa, MAO inhibitory, metyldopa, nikotin, nosní kapky, prochlorperazin, propafenon, reserpin, teofylin, tricyklická antidepresiva, vasodilatancia.