vyšetření primární hemostázy, PFA-100

Vyšetření se provádí z citrátové krve, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla > 1 min. Transport materiálu do laboratoře do 2 h při 15 – 25 °C. Vyšetření musí být provedené do 4 h.

Tento test zahrnuje tvorbu primární trombocytové zátky (adheze + agregace) a je považován za jakousi laboratorní náhradu vyšetření času krvácení. Vyšetření se provádí na speciálním patentovaném systému PFA-100, který je složen z měřicího přístroje a měřicích modulů, pomocí kterých se in vitro simuluje adheze a agregace trombocytů při vysokých smykových rychlostech obdobně, jako když dojde k poranění krevních vlásečnic. Výhodou je rychlé přezkoušení funkce trombocytů za použití malého množství citrátové plné krve. Testování je založeno na principu popsaném Bornem a Kratzerem. Jednorázový modul používaný pro měření obsahuje kapiláru, biologicky aktivní membránu obsahující uprostřed otvor a zásobník na vzorek. Po napipetování do zásobníku je vzorek plné citrátové krve nasáván do kapiláry a dostává se na membránu. Membrána je potažena subendoteliálním proteinem (kolagenem), který aktivuje trombocyty (používá se koňský kolagen typu I) a dvěma dalšími fyziologickými induktory, které mají také uplatnění v agregometrii, a to epinefrin (adrenalin) nebo ADP (adenosin difosfát). Vytváří tak dva měřící moduly kolagen/epinefrin, nebo kolagen/ADP. V průběhu testu se trombocyty zachytávají na kolagenem pokrytou membránu, dochází k aktivaci trombocytů, a jakmile dojde ke styku s induktorem ADP nebo epinefrinem, následuje vznik primární trombocytové zátky, která postupně uzavře otvor na membráně a tím znemožní průtok krve. Analyzátor sleduje nepřetržitě průtok krve od prvního kontaktu s membránou až do doby, kdy se průtok krve zcela zastaví. Toto časové období se nazývá čas uzavření  (closure time - CT). CT je indikátorem funkce trombocytů ve vyšetřovaném vzorku plné krve. CT se uvádí v sekundách.

Vyšetření je citlivé na koncentraci citrátu (používat jednu koncentraci), času zpracování vzorku (nelze vyšetřovat vzorky starší 4 h).

Vyšetření se také používá na odhalení rezistence na aspirin nebo monitorování antiagregační léčby.

Toto vyšetření má vysokou negativní prediktivní hodnotu pro poruchu primární hemostázy.

Modul kolagen/epinefrin se používá jako screening a v případě fyziologického výsledku není nutné vyšetření v modulu kolagen/ADP. 

Blokátory ADP, jako je např. klopidogrel, mají nepředvídatelný vliv.

Zkrácení času: trombocyty nad 500x10⁹/l, hematokrit nad 0,500, přítomnost mikrosraženin, akutní infarkt myokardu.

Prodloužení času: nízký hematokrit, trombocytopenie, jedinci s krevní skupinou 0 (nižší hladiny von Willebrandova faktoru), kouření, etanol, kofein, česnek, kmín, kurkuma, urémie, onemocnění jater; léky: COX-inhibitory jako je aspirin nebo nesteroidní antiflogistika (prodloužení CT kolagen/epinefrin), inhibitory GpIIb/IIIa receptorů (abciximab, eptifibatid, tirofiban), penicilin, cefalosporin, nitrofurantoin, hydroxychlorochin, amfotericin, vasodilatátory, diuretika (hlavně furosemid), blokátory kalciového kanálu, beta-blokátory, heparin, lepirudin, agratroban, bivalirudin, streptokináza, urokináza, tkáňový aktivátor plazminogenu, tricyklická antidepresiva, chlorpromazin, lokální a celková anestézie, mithramycin, daunorubicin, dextrany, radiografické kontrastní látky, inhibitory fosfodiesterázy.