Anti-kravské mléko IgG+IgA, cow s milk IgG antibody, cow s milk IgA antibody 

Venózní srážlivá krev odebraná nalačno. Sérum (plazma) je stabilní při laboratorní teplotě 4 h, při 4 – 8 °C 4 – 7 d, při -20 °C 1 rok. Nepoužívat hemolytická, lipemická a bakteriálně kontaminovaná séra.

ELISA IgG používá jamky mikrotitrační destičky potažené čerstvým nízkotučným kravským mlékem. Destička se centrifuguje při 4 °C přes noc, aby se odstranil mléčný tuk. Po promytí se přidá vzorek séra ředěný fosfátovým pufrem (1:100) a nechá se inkubovat 1 h za laboratorní teploty. Po promytí fosfátovým pufrem se přidá konjugát křenové peroxidázy s prasečí protilátkou vůči lidskému IgG a inkubuje se s o-fenylendiaminem. Absorbance se měří při 405 nm, je přímo úměrná množství protilátek, a vyjadřuje se v arbitrárních jednotkách (stonásobek absorbance vzorku/ absorbance standardu; standard je sérový pool 100 batolat bez příznaků intolerance ke kravskému mléku). 

V jiné soupravě se inkubuje vzorek s mléčným antigenem 30 min. Po propláchnutí 3x je přidán konjugát křenové peroxidázy a králičí protilátky vůči lidskému IgG. Následuje druhá inkubace 30 min a poté se nevázaný konjugát vymyje 4x. Přidá se tetrametylbenzidin a enzymová reakce se zastaví po 10 min stop činidlem. Výsledná absorbance se měří do 10 min vertikální fotometrií při 450/620 nm. Výsledky lze vyjadřovat v kU/l (např. cut-off kalibrátor má 25 kU/l).

ELISA IgA používá jamky mikrotitrační destičky potažené čerstvým nízkotučným kravským mlékem. Destička se centrifuguje při 4 °C přes noc, aby se odstranil mléčný tuk. Po promytí se přidá vzorek séra ředěný fosfátovým pufrem (1:10) a nechá se inkubovat 1 h za laboratorní teploty. Po promytí fosfátovým pufrem se přidá konjugát křenové peroxidázy s prasečí protilátkou vůči lidskému IgA a inkubuje se s o-fenylendiaminem. Absorbance se měří při 405 nm, je přímo úměrná množství protilátek, a vyjadřuje se v arbitrárních jednotkách (stonásobek absorbance vzorku/ absorbance standardu; standard je sérový pool 100 batolat bez příznaků intolerance ke kravskému mléku). 

V jiné soupravě se inkubuje vzorek s mléčným antigenem 30 min. Po propláchnutí 3x je přidán konjugát křenové peroxidázy a králičí protilátky vůči lidskému IgA. Následuje druhá inkubace 30 min a poté se nevázaný konjugát vymyje 4x. Přidá se tetrametylbenzidin a enzymová reakce se zastaví po 10 min stop činidlem. Výsledná absorbance se měří do 10 min vertikální fotometrií při 450/620 nm. Výsledky lze vyjadřovat v kU/l (např. cut-off kalibrátor má 25 kU/l).

Vedle orientačních průkazů sumy protilátek vůči kravskému mléku typu IgG nebo IgA lze semikvantitativně (vyjádřeno v kU/l) prokazovat IgG, resp. IgA protilátky jednotlivých složek kravského mléka, tj. kaseinu, α-laktalbuminu a β-laktoglobulinu.

V dostupné literatuře nejsou uvedené.