DHEAS, DHEA-S, DHEA sulfát,  dehydroandrosteron sulfát, dehydroisoandrosterone 3-sulfát, prasteron sulfát, mylis;

3β-hydroxy-5-androsten-17-on 3-sulfát, 5-androsten-3β-ol-17-on sulfát;

obchodní název: Teloin

DHEAS je vylučován výhradně nadledvinami, proto je DHEA citlivějším ukazatelem metabolických poměrů v periferii. Stanovení se provádí v séru nebo plazmě (antikoagulans EDTA). Stabilita v séru při 18 – 25 °C 2 – 4 d, při 2 – 8 °C 7 d, při -20 °C až 5 let. Výsledky podléhají sezónní variabilitě s maximem v srpnu až říjnu a únoru až dubnu. Ruší chylosní vzorky. Opakované rozmrazování se nedoporučuje.

RIA Uplatňuje se kompetitivní postup, kdy vzorky a kalibrátory jsou inkubovány 30 min (37 °C) s ¹²⁵I-DHEAS ve zkumavkách potažených protilátkou vůči DHEAS. Po inkubaci se obsah zkumavek vylije, nechá odkapat a radioaktivita precipitátu se měří gama-počítačem (1 min). Signál je nepřímo úměrný koncentraci DHEAS ve vzorku. Rozsah měření na základě šestibodové kalibrace 0,16 – 27 µmol/l. Analytická citlivost je 0,16 µmol/l (jiná souprava uvádí 0,05 µmol/l). Preciznost v sérii je ≤ 7,4 %, mezi sériemi ≤ 10,6 %; zpětný výtěžek 90 – 110 %, linearita ředění 90 – 105 %. Bilirubin a hemolýza neruší. Křížová reaktivita: DHEA 0,08 %. Heterofilní protilátky mohou interferovat při stanovení.

ELISA na mikrotitračních destičkách je kompetitivní postup, který používá zakotvenou králičí polyklonální protilátku vůči DHEAS a do jamek se přidává vzorek nebo kalibrátor a DHEAS značený POD. Po inkubaci (45 min, laboratorní teplota) a promytí 3x se přidá tetrametylbenzidin s H₂O₂. Roztok se inkubuje 15 – 20 min (laboratorní teplota), pak se pipetuje stop činidlo (1 M H₂SO₄). Absorbance při 450 (případně 405 nebo 415) nm se měří do 20 min a je nepřímo úměrná koncentraci DHEAS ve vzorku. Na základě sedmibodové kalibrace je rozsah metody 0,13 – 27 µmol/l (vzorky s vyššími koncentracemi se ředí 8x). Analytická citlivost je 0,13 µmol/l. Preciznost v sérii je 7,5 – 11,5 %, mezi sériemi 4,2 – 15,3 %; zpětný výtěžek 80,9 – 120,7 %, linearita ředění 86,5 – 104,2 %. Křížová reaktivita: androsteron 16 %, androstendion 1,7 %, testosteron 0,9 %, progesteron 0,6 %, dihydrotestosteron 0,6 %, kortizol 0,5 %. Silná hemolýza, lipémie a ikterus ruší.

Při FPIA soutěží fluoresceinem značený DHEAS a volný DHEAS ze vzorku o vazebná místa králičí polyklonální protilátky. Pouze konjugát vázaný na protilátku poskytuje v polarizačním světle fluorescenční signál, takže jeho velikost je nepřímo úměrná množství DHEAS ve vzorku. Analýza trvala 15 min, rozsah měření byl 0,03 – 27 µmol/l. Preciznost v sérii ± 10 %. V současné době už není souprava na trhu.

Chemiluminiscenční analýza začíná smícháním vzorku s ředícím roztokem a paramagnetickými částicemi potaženými monoklonální myší protilátkou vůči DHEAS. DHEAS přítomný ve vzorku se naváže na protilátku. Po inkubaci se přidá konjugát DHEAS značený akridiniumkarboxamidem a naváže se na neobsazená místa protilátky. Po druhé inkubaci a promytí fosfátovým pufrem se přidá 1,32 % peroxid vodíku a 0,35 M roztok hydroxidu sodného. Vzniklá chemiluminiscence je nepřímo úměrná hladině DHEAS a sleduje se fotonásobičem při 429 nm.Metoda dovoluje měřit vzorky na základě šestibodové kalibrace a čtyřparametrové logistické křivky v rozmezí hodnot 0,08 – 40,7 µmol/l (vzorky s hodnotami DHEAS > 40,7 µmol/l lze manuálně ředit 2x, po ředění musí být hodnota > 0,08 µmol/l). Analytická senzitivita 0,08 nmol/l. Preciznost v sérii je 1,38 – 4,24 %, celkově 2,93 – 7,41 %; zpětný výtěžek průměrně 102 %, linearita ředění 98 – 103 %. Ani vysoké koncentrace hemoglobinu, bilirubinu a triacylglycerolů neruší. Při analýze může rušit RF. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky. Vzorky séra lze zmrazit a rozmrazit maximálně 5x a vzorky plazmy jen 2x.

Podobný princip zábleskové luminiscence lze použít s esterem akridinu jako značkou. K DHEAS ze vzorku se pipetuje biotinylovaná monoklonální myší protilátka vůči DHEAS. Po inkubaci 2,75 min při 37 °C se přidá DHEAS značený esterem akridinu. Po druhé inkubaci 2,75 min při 37 °C se přidají paramagnetické latexové částice potažené streptavidinem. Při třetí inkubaci 2,75 min při 37 °C se na částice připojí imunokomplex. Po odsátí roztoku a promytí zkumavek se přidá peroxid vodíku a roztok NaOH a ihned se měří vznikající luminiscenční záblesk (intenzita signálu je nepřímo úměrná koncentraci DHEAS) fotonásobičem při 429 nm. Vzorky s koncentrací DHEAS > 40,7 µmol/l se ředí automaticky 2x. Analytická citlivost je 0,08 µmol/l. Preciznost v sérii 3,9 – 7,9 %, mezi sériemi 5,7 – 9,0 %. Linearita ředění je 99 – 113 %, zpětný výtěžek 89 – 109 %. Hemolýza, lipémie a ikterus neruší.

CLIA je dvojstupňový kompetitivní zábleskový postup. Magnetické částice jsou potažené myší monoklonální protilátkou vůči DHEAS. DHEAS ze vzorku a DHEAS značený izoluminolem soutěží o její vazebná místa. Imunoreakce probíhá 21 min, po promytí se přidá startér (0,12 % H₂O₂ + 4 % NaOH) a fotonásobičem se měří záblesk. Intenzita signálu je nepřímo úměrná hladině DHEAS. Rozsah měření na základě dvoubodové kalibrace je 0,03 – 20,3 µmol/l (vyšší koncentrace DHEAS lze naředit 10x automaticky). Analytická citlivost 0,01 µmol/l, funkční citlivost 0,04 µmol/l. Preciznost v sérii 3,0 – 10,1 %, mezi sériemi 3,6 – 11,9 %; linearita ředění 96,9 – 115,2 %, zpětný výtěžek 96 – 107,8 %. Hemolýza, bilirubin a lipémie neruší. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

Jiné stanovení je založeno na kompetitivní imunochemické reakci. DHEAS v prostředí pufrovaného roztoku soutěží s DHEAS značeným ALP o vazebná místa na polyklonální králičí protilátce imobilizované na polystyrenové kuličce. Reakce probíhá 30 minut při 37 °C. Po odstranění nezreagovaného materiálu odstředěním a promytí se přidá substrát adamantyldioxetanfenylfosfát, který hydrolyzuje stykem s alkalickou fosfatázou za vzniku nestabilního meziproduktu. Ten se ihned rozpadá za vzniku záření, které se detekuje luminometrem. Intenzita vzniklého záření 425 – 500 nm je nepřímo úměrná koncentraci DHEAS ve vyšetřovaném vzorku. Výsledky jsou stanoveny podle kalibrační křivky, která je pro přístroj specifická a je určena na základě dvoubodové kalibrace (v kvadrupletu) a vzorové křivky získané z čárového kódu činidla. Signál je nepřímo úměrný koncentraci DHEAS. Rozsah měření je 0,41 – 27 µmol/l. Všechny vzorky, jejichž koncentrace by mohla být mimo kalibrační rozmezí, je třeba naředit. Analytická citlivost 0,08 µmol/l. Preciznost v sérii 6,8 – 9,5 % %, celková 8,1 % – 15 %; linearita ředění 94 – 106 %, zpětný výtěžek 93 – 109 %. Neruší hemoglobin a bilirubin. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

Další postup používá podobný luminogen Lumi-Phos 530. Do zkumavky se pipetuje standard nebo vzorek obsahující DHEAS, králičí polyklonální protilátku vůči DHEAS, konjugát DHEAS s ALP a paramagnetické částice potažené kozí polyklonální protilátkou vůči králičímu IgG. Po inkubaci (imunokomplex se přichytí na magnetické částice přes kotvící protilátku) se separací v magnetickém poli a promytím odstraní nenavázané složky. Dále se přidá chemiluminiscenční substrát. Emitované světlo je nepřímo úměrné množství DHEAS. Rozsah měření při 470 nm na základě šestibodové kalibrace je 0,05 – 27,1 µmol/l. (po ředění 10x až do 271 µmol/l). Analytická citlivost < 0,05 µmol/l. Preciznost v sérii 1,6 – 8,3 %, mezi sériemi 3,7 – 11,3 %. Linearita ředění 94,8 – 116,2 %, zpětný výtěžek 101,6 – 109,2 %. Hemoglobin (10 g/l), bilirubin (513 µmol/l) ani triacylglyceroly (19,7 mmol/l) neruší. Při reakci mohou interferovat heterofilní protilátky.

LC-MS/MS používá jako mobilní fázi A: 0,1 % kyselinu mravenčí ve vodě, B: metanol, C: aceton:acetonitril:izopropylalkohol (10:45:45). Retenční čas pro DHEAS je 0,9 min, pro DHEA 2,1 min. Hmotnostní spektrometr používá pozitivní iontové uspořádání a kolizním plynem je argon, pomocným plynem je dusík. Teplota v odpařovači je 382 °C, v kapiláře je 275 °C.  Rozsah měření DHEAS 0,033 – 17,097 µmol/l, DHEA 0,24 – 121 nmol/l. Preciznost v sérii pro DHEAS 4,6 %, pro DHEA 13,8 %; mezi sériemi pro DHEAS 7,1 – 8,3 %, pro DHEA 8,6 – 15,7 %. Jako vnitřní standardy se používaly hexadeuterované (2,2,3,4,4,6) DHEAS a (2,3,3,4,4,6) DHEA deriváty.

Závazný mezinárodní standard není uvedený, ale k dispozici jsou velmi kvalitní certifikované standardy.

Toleranční limit EHK: 21 %.

Hodnoty snižuje: alkoholismus, obezita, estradiol, glukóza, gravidita, kojenci, věk > 20 let, deprese (ráno), orální kontraceptiva.

Hodnoty zvyšuje: ACTH, danazol, klomifen, hladovění, tělesná zátěž, psychický trénink (až o 100 %), nepřítomnost menstruace, kouření, muži > ženy.