Popis vyšetření: OROSOMUKOID

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

alfa-1-kyselý glykoprotein, alpha 1 acid glycoprotein, alpha-1-acid glycoprotein, alfa-1-seromukoid, orosomucoid AAG, AGP, alfa-1-GP, alfa-1-AG, alpha-1-AGP, OMD, ORM1

Žádná z uvedených zkratek není oficiální. Upřednostňuje se název alfa-1-kyselý glykoprotein před názvem orosomukoid (kromě Švédska); alfa-1-seromukoid je zastaralé označení.

Preanalytická fáze:

Stanovení se provádí v séru nebo plazmě, případně v moči nebo likvoru. Maximální čas od získání
do zpracování vzorku je 1 den při doporučené teplotě 4°C, při laboratorní teplotě pouze 1 h. Stabilita (sérum, plazma): 20 – 25 °C 1 den, 4 – 8 °C 3 – 7 dnů, -20° C 3 – 6 měsíců, -70° C několik let. Opakované rozmrazování vzorku se nedoporučuje. Stanovení ruší chylozita a hemolýza.
Alfa-1-kyselý glykoprotein je bílkovina s molekulovou hmotností 44 000. Intraindividuální variace dosahuje 11 – 19,3 % během 4 měsíců. Biologický poločas 5 až 6 dní.

Poznámky k analytické metodě:

Z imunochemických metod se nejvíce používá nefelometrie nebo turbidimetrie (radiální imunodifuze
a radioimunoanalýza jsou již zastaralé).
Turbidimetrické stanovení se provádí po reakci s protilátkou v přítomnosti polyetylenglykolu 6000 při pH 6,8 (fosfátový pufr). Detekce se provádí po 4 min při 450 nm. Mez detekce je 500 µg/l. Reprodukovatelnost mezi sériemi má CV 2,4 %. Pro stanovení v moči byla použita králičí protilátka, na kterou byly kovalentně navázané polystyrenové částice. Takto byl detekční limit snížený až na 50 µg/l. Rozsah měření byl 0,07 – 50 mg/l. Reprodukovatelnost v sérii byla CV 1,0 – 6,7 %, celková nepřesnost 3,4 – 10,4 %, vychýlení 95 – 132 %.
Při detekci laserovou nefelometrií byla reprodukovatelnost v sérii CV 2,1 – 4,2 %, mezi sériemi 2,9 – 5,2 % (kozí antisérum). 
Stanovení alfa-1-kyselého glykoproteinu lze provádět také v sendvičovém uspořádání soupravou ELISA na mikrotitračních destičkách. Kotvící protilátkou je kuřecí protilátka vůči lidskému alfa-1-kyselému glykoproteinu. Jako marker se používá peroxidáza, která je spojena s kuřecí protilátkou vůči lidskému alfa-1-kyselému glykoproteinu. Substrátem je tetrametylbenzidin a barevná reakce se zastavuje 2M kyselinou sírovou. Fotometrická detekce se provádí při 450 nm. Reprodukovatelnost CV v sérii 0,2 – 1,6 %, měřený rozsah je 2,74 – 2000 µg/l.

Při elektroforéze se pohybuje v zóně mezi albuminem a alfa-1-globuliny. Vzhledem k tomu, že má malou afinitu k barvivům ovlivní intenzitu odpovídající frakce až při koncentracích vyšších než 2 g/l. Proto je pro odhad koncentrace alfa-1-kyselého glykoproteinu elektroforéza na agarózovém gelu nevhodná. Na škrobu nebo polyakrylamidovém gelu (fungují jako molekulová síta) získáme 7 frakcí alfa-1-kyselého glykoproteinu. Tyto frakce jsou důsledkem různého zastoupení sacharidové složky v alfa-1-kyselém glykoproteinu.

S použitím referenčního materiálu CRM 470 bylo dosaženo při imunoturbodimetrické detekci nejistoty
13,3 mg/l.
Tolerační rozmezí EKK je 18 %.

Významné interference:

Výsledky stanovení alfa-1-kyselý glykoproteinu snižují: abstinence u alkoholiků, aktinomycin, estrogeny, puromycin, vegetariánská dieta, těhotenství, aj.
Výsledky stanovení alfa-1-kyselý glykoproteinu zvyšují: androgeny, cvičení (zvyšuje i koncentraci v moči), kouření, menopauza, obezita, aj.