NAG;

N-acetyl-beta-D-glucosaminidase, chitobiase, chitobiose acetamidodeoxyglucohydrolase, EC 3.2.1.29

Poznámka: všechny tyto názvy byly již v roce 1972 zrušeny a nyní je platný EC 3.2.1.52, tedy systematický: β-N-acetyl-D-hexosaminide N-acetylhexosaminohydrolase,

případně akceptovaný: β-N-acetylhexosaminidase

a další názvy: hexosaminidase, β-acetylaminodeoxyhexosidase, N-acetyl-β-D-hexosaminidase, N-acetyl-beta-hexosaminidase, β-hexosaminidase, β-acetylhexosaminidinase, β-D-N-acetylhexosaminidase, β-N-acetyl-D-hexosaminidase, β-N-acetylglucosaminidase, hexosaminidase A, N-acetylhexosaminidase, β-D-hexosaminidase;

beta-N-acetylhexosaminidasa

Jednorázový vzorek čerstvé moče (druhá ranní moč), odběr mezi 6. a 10 h; současně je třeba stanovit kreatinin (z 8 h sběru). Minimální hodnoty jsou v noci, maximální v ranních hodinách (rozdíl až 100 %). Moč je stálá 1 d při 20 – 25 °C, 7 d při 4 – 8 °C, při -20 °C 6 měsíců. Stanovení lze provádět také v séru nebo plazmě. Vzorky se analyzují do 30 min po odběru nebo zamrazí na -20 °C. Opakované rozmrazování se nedoporučuje.

Fotometrie je základní metodou ke stanovení NAG, adaptovatelnou pro automatické analyzátory. Metoda je lineární do 200 U/l (jednobodová kalibrace). Enzym hydrolyzuje 2-metoxy-4-(2´nitrovinyl)-fenyl 2-acetamido-2-deoxy-β-D-glukopyranosid (MNP-GlcNAc) na 2-metoxy-4-(2´nitrovinyl)-fenol. Reakce probíhá při 37 °C a detekuje se dvoubodovou kinetikou za 300 a 330 s při 505 nm. Souprava je určena ke stanovení v moči.

Jinou variantou je E. P. provedení s intervalem měření 0,16 – 33 U/l; s 2-metoxy-4-(2´-nitrovinyl)-fenyl N-acetyl-β-D-glukosaminidem probíhá 30 min v pufru (citrát+ fosfát), přidá se vybarvovací činidlo (roztok KHCO₃ a K₂CO₃);  měření se provede po 10 min při 505 nm.

Byl také navržen substrát amoniová sůl 5-[4-(2-acetamido-2-deoxy-β-D-3-metoxyfenylmetylen]-2-tioxotiazolidin-4-on-3-etanoátu, která uvolňuje reakcí s NAG fenol s maximem absorbance 492 nm, a reakce má ve srovnání s předchozím postupem dvojnásobnou citlivost.

ELISA v kompetitivním uspořádání má v jamkách mikrotitrační destičky zakotvenou protilátku vůči NAG. Vzorek soutěží s konjugátem NAG-křenová peroxidáza o omezený počet vazebných míst specifické protilátky (inkubace 60 min při 37 °C); poté se jamky 3x vymyjí promývacím pufrem. Po přidání tetrametylbenzidinu a H₂O₂ (inkubace 15 min při 37 °C ve tmě)se reakce zastaví stop činidlem a měří se do 10 min absorbance při 450 nm, která je nepřímo úměrná množství NAG. Na základě pětibodové kalibrace je rozsah měření 5 – 2000 U/l. Mez detekce je 2 U/l NAG. 

Jiná ELISA umožňuje stanovit izoenzym B a probíhá ve dvoustupňovém uspořádání, kdy se v prvním stupni během 2 h při 30 °C naváže NAG. Po čtyřnásobném promytí pufrem se přidá konjugát Fab´ fragmentu monoklonální protilátky Hex 32 s POD. Po 1 h inkubaci při 30 °C a promytí pufrem (4x) se přidá substrát ABTS, tj. 2,2-azino-bis(3-etylbenzotiazolin-6-sulfonová kyselina) diamoniová sůl a nechá se 15 min inkubovat při 30 °C. Pak se přidá stop činidlo (citrátový pufr) a měří se absorbance při 415 nm, která je přímo úměrná koncentraci NAG. Reakce probíhá v rozsahu 0,5 – 80 µg/l NAG. Mez detekce je 0,5 µg/l NAG. Preciznost v sérii je 2,5 – 5,4 %, mezi sériemi 6,2 – 9,1 %; zpětný výtěžek 91 – 114 %. Při reakci neruší hemoglobin 50 g/l.

Iontově-výměnná chromatografie na DEAE-celulóze s fluorimetrickou detekcí byla použita ke stanovení NAG v moči.

Hodnoty snižuje: dehydratace, tělesné cvičení.

Hodnoty zvyšuje: vzestup s věkem (ale i v dětství jsou hodnoty vyšší), vysoká specifická hmotnost moče, alkoholismus, horečka (pokud není renálního původu), těhotenství (3-4x nad normu v 3. trimestru), obezita, expozice kadmiu a olovu, po ejakulaci (3 dny).