Popis vyšetření: Protilátky vůči ADENOVIRŮM

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

adenovirus antibodies (IgG + IgM), polyclonal adenovirus, anti-adenovirus

Preanalytická fáze:

Průkaz se provádí v séru, likvoru nebo stolici. Stabilita v séru a likvoru: 2 d při 4 – 8 °C, 14 d při -20 °C. Stabilita ve stolici: 2 h při 20 – 25 °C, 3 d při 4 – 8 °C, dlouhodobě po zmrazení.

Poznámky k analytické metodě:

Jedná se o kvalitativní test.

Byla porovnávaná citlivost testů fixací komplementu, hemaglutinační inhibicí (HI) a neutralizací séra. Nejlepší odezvu dávala neutralizace séra, následována HI ve filtrátu Pseudomonas, dále fixace komplementu, HI neupraveného séra a HI séra upraveného kaolinem. Ačkoliv jiné práce uvádějí, že pasivní HI je 10 – 100x citlivější než ostatní uvedené metody. HI a neutralizační test jsou specifičtější než fixace komplementu. Také protisměrná imunoelektroforéza je citlivější než fixace komplementu. Popsána je také imunofluorescenční analýza, ale nejvyšší specifitu vykazuje ELISA.

Také ELISA poskytuje kvalitativní výsledky zvláše pro IgG a IgM protilátky. Mikrotitrační destičky jsou potažené příslušným antigenem, na který se připojí protilátka vůči adenoviru IgG nebo IgM (inkubace 1h, 37 °C). Po trojnásobném promytí se přidá konjugát adenoviru s křenovou peroxidázou (inkubace 30 min za laboratorní teploty – chránit před slunečním světlem). Po ukončení imunoreakce a trojnásobném promytí se přidá tetrametylbenzidin a barevná reakce (15 min ve tmě za laboratorní teploty) se zastaví stop činidlem a měří se do 30 min při 450 proti 620 nm. Preciznost v sérii IgG 6,1 %, IgM 11,3 %; mezi sériemi IgG 4,3 %, IgM 8,3 %. Hemoglobin 10 g/l, triacylglyceroly 5,65 mmol/l a bilirubin 342 µmol/l reakci neruší. ELISA soupravy jsou komerčně dostupné a všechny ostatní postupy jsou buď minulostí, nebo naopak záležitostí výzkumu (PCR).

Protože i některé velké laboratoře stále používají komplement fixační reakci (KFR), uvádím její princip. Komplement je vícesložkový rozpustný systém krevní plazmy, který je aktivován protilátkou navázanou na antigen.Při KFR se napřed smísí naředěné sérum s příslušným antigenem a se známým množstvím komplementu. Pokud je v séru přítomna hledaná protilátka, váže se na antigen a dojde k aktivaci a spotřebování přítomného komplementu. Nyní se přidají beraní erytrocyty a protilátka vůči povrchu těchto erytrocytů (tzv. amboceptor). Byly-li v séru hledané protilátky, účinný komplement již nezbývá a erytrocyty nepoškozeny sedimentují na dně jamky (Po reakci s antigenem váže protilátka komplement). To je důkaz přítomnosti hledaných protilátek v séru pacienta. V opačném případě se komplement nespotřeboval, aktivuje se až nyní a způsobí lýzu erytrocytů (Po zachycení na erytrocytu aktivuje amboceptor svým Fc fragmentem komplement a ten destruuje erytrocyt). To signalizuje nepřítomnost protilátek v séru pacienta.

Významné interference:

Žádné interference nejsou v dostupné literatuře uvedené.