|
Popis vyšetření: C 1q složka komplementu
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
C1Q složka komplementu; complement C1q, component C1q, C1qa, C1QA HUMAN, complement C1q subcomponent subunit A. Preanalytická fáze:
Odběr nalačno není nutný. Analýza se provádí v plazmě (koagulant EDTA, heparin nebo citronan) nebo séru. Stanovení lze provádět i ve slinách, moči, buněčných kulturách a mléku. Stabilita vzorku (plazma, sérum): 18 - 25 °C 1 – 4 d, 2 - 8 °C 7 – 10 d, -20 °C 1 – 3 měsíce. Nepoužívat lipemická, hemolytická nebo mikrobiálně kontaminovaná séra. Poznámky k analytické metodě:
Stále používanou metodou je radiální imunodifuze. Je to jednoduchá kvantitativní imunodifuzní technika. Když je dosaženo rovnováhy mezi vnější a vnitřní reagující složkou, vytvářejí se kruhové precipitační plochy kolem bodu s vnější složkou. Plochy jsou přímo úměrné koncentraci antigenu v gelu a nepřímo úměrné koncentraci protilátky v gelu. Jestliže je gelová vrstva nasycená protilátkou, pak vzniká imunokomplex ve formě precipitačního prstence, jehož plocha je přímo úměrná koncentraci stanovovaného antigenu. Protilátka musí být přísně monovalentní. Při přidávání protilátky do gelu nesmí být překročena teplota 52 ºC, aby nedošlo k denaturaci bílkovin. Při nalévání gelu musí být sklíčko ve vodorovné poloze, aby byla zajištěna rovnoměrná výška vrstvy. Gelová vrstva musí být bez bublin a hrbolků. Jamky musí být naplněny konstantním objemem vzorku, nesmí dojít k přeplnění ani nedoplnění. Musí být zajištěno správné ředění. Nelze hodnotit prstence deformované, s dvojitou konturou nebo příslušející roztržené startovní jamce. Dalším postupem je imunoprecipitační reakce s protilátkou vůči složce C1q s nefelometrickou nebo turbidimetrickou detekcí. ELISA sendvičového typu používá mikrotitrační destičky potažené protilátkou vůči složce C1q. Do jamek se přidává standard nebo vzorek (inkubace 2 h) a biotinylovaná protilátka vůči složce C1q. Po inkubaci (1 h) a vypláchnutí (3x) se přidává konjugát streptavidinu s křenovou peroxidázou. Po inkubaci (30 min) a promytí (5x) se přidá tetrametylbenzidin a po ukončení barevné reakce (15 – 25 min) stop činidlo (např. 0,5 M HCl). Zbarvení při 450 nm je přímo úměrné koncentraci C1q složky komplementu. Analýza trvá celkem 4 h. Rozsah měření na základě šestibodové kalibrace 0,039 – 40 µg/l (jiná souprava 7,8 – 500 µg/l, další 0,078 – 5 µg/l). Citlivost metody > 0,03 µg/l. Celková preciznost je 4,6 %, zpětný výtěžek 97,5 %. Významné interference:
Snížené hodnoty u systémového lupu erythematodes a získaného angioedému. |