APTT, aPTT, Activated partial tromboplastine time 

Vyšetření se provádí z citrátové plazmy chudé na destičky, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla déle než 1 min. Transport materiálu do laboratoře do 2 h. Stabilita plazmy je 4 h při 15 až 25 °C. V případě léčby heparinem se doporučuje oddělit plazmu do 30 min; vzorek se centrifuguje 10 min při 1800 až 2500 g, nejlépe dle doporučení výrobce odběrového systému.

V případě zmrazení plazmy lze skladovat 4 týdny při -20 °C nebo 6 měsíců při -70°C . Pro následné zpracování zmrazené plazmy je nutno plazmu rozmrazovat po dobu cca 5 min ve vodní lázni cca 37 °C, šetrně promíchat a ihned provést měření. Rozmražené vzorky plazmy nelze opakovaně zamrazovat.

Metoda je založená na aktivaci vnitřní koagulační cesty a proměny protrombinu na trombin, který štěpí fibrinogen na fibrin, čímž dojde ke koagulaci. Reakce je dvoustupňová; v první fázi se k vzorku plazmy přidává směs aktivátoru a fosfolipidů a po inkubaci se plazma rekalcifikuje přidáním roztoku chloridu vápenatého. Sledujeme čas od rekalcifikace do vzniku koagula. Jako aktivátory se používají různé substance, např. oxid křemičitý, kyselina gallová, kaolin. Důležité je, aby byly v nesedimentující koloidní formě. Kaolin se používá méně pro optické systémy, jelikož způsobuje zákal. Dále je vhodnější použití syntetických fosfolipidů, než z přírodního zdroje, jelikož je snazší reprodukovatelnost jednotlivých šarží.

Na výsledek má vliv inkubační doba aktivace. Při kratších časech cca 2 min je test citlivější na tzv. aktivační faktory, zatímco při prodloužení až na 10 min je test k těmto faktorům málo citlivý. Dle složení reakční směsi (převážně druh a množství fosfolipidů) může mít aPTT test různou citlivost k přítomnosti inhibitorů (hlavně heparinu), koagulačních faktorů, resp. k antifosfolipidovým protilátkám (lupus antikoagulans).

Nejčastější typ detekce je optický (turbidimetrie) a mechanický (kovová kulička v magnetickém poli). Obě metody mají své výhody i nevýhody. Optické metody jsou finančně méně náročné, jelikož stačí převážně 150 µl reakční směsi v kyvetě, kdež to u mechanické detekce je nutný objem větší, aby se kulička celá ponořila. Mechanická detekce na druhé straně není závislá na zbarvení, resp. zakalení vzorku (ikterické, chylózní, hemolytické vzorky), co lze u optické metody minimalizovat detekci při 671 nm. U optických analyzátorů je nutné zohlednit i způsob odečtu času koagulace z reakční křivky. Většina přístrojů volí inflexní bod křivky, resp. 50 % absorbance, kde počáteční absorbance se bere jako 0 % a konečná 100%. Nejvhodnější je způsob odečtu matematickým zpracováním křivky a to její druhou derivací, kde koagulační čas se odečte v maximu druhé derivace původní reakční křivky. Je to část křivky, kde dochází k největšímu nárůstu koagula.

Výsledky testu se udávají jako poměr koagulačního času vzorku a času normální plazmy. Uvádění normálních hodnot může být zavádějící, jelikož závisí na typu reagencie, analyzátoru a detekce. Všeobecně u dospělých platí, že poměr koagulačního času normálního vzorku ke koagulačnímu času normální plazmy je 0,8 – 1,2.

Jelikož pokrývá aPTT jen část koagulační kaskády, je vhodné interpretaci provádět v souvislosti s ostatními screeningovými testy.

Precíznost v sérii je 0,34 - 2,9 %, mezi sériemi 0,52 - 4,9 %.

CV nesmí být větší než 10 %, optimálně do 5%. Toleranční limit v EHK je 20%. Intraindividuální CV je 2,7%

Snížení hodnot: nedodržení poměru s antikoagulačním činidlem (přeplnění zkumavky), hemolytická plazma (aktivace koagulace erytrocytární složkou), akutní zánět, nízký hematokrit, odběr u sedícího a stojícího pacienta, gravidita, intenzívní míchání vzorku

Zvýšení hodnot: odběr menšího množství krve, špatný odběr krve, vysoký hematokrit, pozdní promíchání vzorku po odběru, odběr z kanily, odběr po krevní transfuzi, peniciliny, kyselina valproová, heparin, orální antikoagulancia, Wobenzym, fyziologicky novorozenci.