plasminogen activator inhibitor 1, profibrinolysin, serpin E1, serpin peptidase inhibitor, clade E, PAIE, PLANH1.

Vyšetření se provádí z citrátové plazmy chudé na destičky, která se získá odběrem žilní krve do zkumavky s citrátem sodným v poměru 1 díl citrátu + 9 dílů krve. Koncentrace citrátu se doporučuje v rozmezí 0,105 až 0,109 mol/l. Při venepunkci je doporučeno používat jehlu o průměru 0,7 až 1,0 mm (tenčí jehly mohou způsobit hemolýzu a předčasnou aktivaci destiček a koagulačních faktorů) a je nutné vyvarovat se použití škrtidla > 1 min. Transport materiálu do laboratoře je nutný ihned na ledu. Stabilita plazmy je 24 h při 2 – 8 °C. Vzorek se centrifuguje 10 min při 1800 až 2500 g, nejlépe dle doporučení výrobce odběrového systému.

V případě zamrazení plazmy se upřednostňuje opakovaná centrifugace a oddělení plazmy 0,5 – 1,0 cm nad suspenzí erytrocytů, jelikož se PAI-1 nachází i v α-granulích trombocytů. Plazmu lze skladovat 4 týdny při teplotě -20 °C nebo 6 měsíců při teplotě -70°C . Pro následné zpracování zamrazené plazmy je nutno plazmu rozmrazovat po dobu 5 min ve vodní lázni o teplotě 37 °C, šetrně promíchat a ihned provést měření. Rozmražené vzorky plazmy nelze opakovaně zamrazovat.

Odběr je doporučeno provádět nalačno v dopoledních hodinách (diurnální cyklus), s vynecháním alkoholu jeden den a cigaret minimálně hodinu před odběrem.

Na stanovení PAI-1 je možné použít imunologické nebo funkční testy.

Imunologické testy stanovují antigen PAI-1. Nejběžnější je ELISA, kde na mikrotitračních destičkách je navázaná specifická protilátka vůči PAI-1. Po inkubaci se vzorkem a promytí se použije druhá protilátka, která je biotinylovaná. V další fázi se použije streptavidin-peroxidázový konjugát. Reakce se detekuje při 450nm pomocí TMB (tetrametylbenzidin) a peroxidu vodíku. V tomto provedení je absorbance přímo úměrná koncentraci PAI-1 ve vzorku. Senzitivita testu je 0.08 ng/ml, měřící rozsah 0.078 ng/ml - 5 ng/ml, výtěžnost 98%. Preciznost v sérii je 4,8 % a mezi sériemi 7,1 %. V jiném provedení testu je na mikrotitrační destičce navázaný tkáňový aktivátor plasminogenu (t-PA), nebo urokináza (u-PA), které vážou PAI-1 ze vzorku. V dalším kroku se použije značená specifická protilátka vůči PAI-1 značená nejčastěji peroxidázou. Reakce se detekuje při 450nm pomocí TMB (tetrametylbenzidin) a peroxidu vodíku.

V provedení latexové imunoaglutinace se latexové částice potažené anti-PAI-1 protilátkou mísí s vyšetřovanou plazmou. V případě navázání PAI-1 na protilátku dojde k aglutinaci, která je detekovaná fotometricky. Preciznost za podmínek opakovatelnosti je 0,9 – 1,8 %, za podmínek reprodukovatelnosti 3,4 – 8,2 %.

Funkční testy:

V chromogenním provedení se k vyšetřovanému vzorku přidá standardní množství t-PA, který vytváří s PAI-1 inaktivní komplex. Metoda pak využívá schopnost zbytkového t-PA aktivovat přidaný plasminogen, který po aktivaci na plasmin štěpí specifický chromogenní substrát za uvolnění p-nitroanilinu. Uvolněné žluté zbarvení se detekuje při 405nm a závislost koncentrace PAI-1 ve vzorku je nepřímo úměrná absorbanci. Senzitivita testu je 0,6 IU/ml, měřící rozsah 0,625 IU/ml – 20 IU/ml. Preciznost v sérii 4,6 % a mezi sériemi 7,0 %.

Hodnoty zvyšuje: heparin, akutní fáze zánětu, akutní infarkt myokardu, septický šok, postoperační stavy, těhotenství.