UPD15

K vyšetření je třeba vzorek venózní krve (2-5 ml) odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA a vzorky amniové tekutiny. Izolace DNA se provádí nejčastěji na práci s extrakčními mikrokolonkami, vysolení DNA či fenol/chloroformové extrakci. DNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování DNA se používá zamrazení vzorku DNA.

Cíl vyšetření: diagnostika uniparentální disomie chromosomu 15 při placentálním mosaicismu, homologní nebo nehomologní Robertsonské translokaci a jako genomický biomarker pro detekci původu chromozomů.

Pacient s maternální UPD 15 trpí Prader-Willi syndromem (PW), zatímco pacient s paternální UPD 15 trpí Angelmanovým syndromem.

CE-IVD soupravy využívají fragmentační analýzu. Desítky genetických markerů na bázi STR (short tandem repeats) lokusů se vyšetřují pomocí kapilární elektroforézy. Určuje se původ chromosomů 15 u daného dítěte. PCR produkty jsou značené fluorescenčně. Výška píků produktů odpovídá počtu příslušných chromosomů. Heterozygotní forma genu má dva píky o stejné velikosti. Tři píky nebo dva píky v poměru 2:1 představují další sekvence STR typické např. pro trisomie.

Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v DNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod.