|
Popis vyšetření: Somatické mutace v NRAS genu
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
NRAS1, somatic mutations Preanalytická fáze:
K vyšetření je třeba řez tkáně zalité v parafinovém bločku nebo tkáň nativní. Vyšetření se provádí z DNA extrahované z parafinového bločku po deparafinizaci. Nejčastěji jsou založené na práci s extrakčními mikrokolonkami. DNA se po izolaci charakterizuje fluorimetricky nebo pomocí real-time PCR. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování DNA se používá zamrazení vzorku DNA. Poznámky k analytické metodě:
Cíl vyšetření: vyloučení mutace k predikci biologické léčby nádorů (maligní melanomy, nádory tlustého střeva aj.). Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 164790 Panel mutací pokrývá zejména kodony 12,13 a 61. CE-IVD soupravy využívají zejména některou ze sekvenačních metod. Velkou perspektivu mají zejména přístupy next generation, kdy je možno paraleně vyšetřit všechny úseky s kódující sekvencí genu nebo se lze zaměřit na vytipované části genu a provést "hluboké" sekvenování s vysokou citlivostí. Tento druhý postup se volí při analýze materiálu s malou buněčností nebo u DNA s vysokou mírou degradace. CE-IVD souprava by vždy měla obsahovat kontrolní vzorky se známým genotypem. Ideální jsou soupravy obsahující kontroly s různými typy mutací a kontrolu bez DNA templátu (demineralizovanou vodu).
Významné interference:
Nebyly popsány, zásadní je stupeň degradace DNA působením fixativa (formaldehyd). |