Popis vyšetření: Panel přestaveb souvisejících s AML

Zařezeno v kategoriích:

Preanalytická fáze:

K vyšetření je třeba vzorek venózní krve či kostní dřeně odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA. Stabilita RNA v biologickém materiálu pro toto vyšetření je udávána do 24 hodin po odběru při teplotě 20-25 °C, materiál se nesmí zamrazovat!   

Vyšetření se provádí z RNA extrahované z buněk bílé krevní řady manuálními nebo automatizovanými postupy. Nejčastěji jsou založené na práci s guanidiniovou solí (Trizol) a extrakčními mikrokolonkami. RNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování RNA se používá proces reverzní transktipce a tvorba cDNA. 

 

Poznámky k analytické metodě:

Cíl vyšetření: potvrzení některé z přestaveb pro diagnostiku a sledování minimální residuální choroby u akultní myeloidní leukémie.   

CE-IVD souprava založená na fragmentační analýze PCR produktů amplifikovaných pomocí multiplexní PCR s primery zančenými různými fluorofory. Detekce se provádí v genetickém analyzátoru na bázi kapilární elektroforézy. Typ přestavby je určen emisním maximem příslušného fluoroforu (fluorescencí) a délkou vzniklého PCR produktu (migrační čas). Kontrolní fragment představuje amplikon nemutovaného genu ABL.

Výška píku či plocha pod křivkou může představovat nástroj pro seminkvantitativní odhad množství transkriptu, což lze využít pro sledování účinnosti navržené léčby a aktuálního klinického stavu pacientů.

Mezi nejčastěji vyšetřované přestavby patří AML1-ETO, BCR-ABL, CALM-AF10, CBFB-MYH11, DEK-CAN, MLL-AF6, MLL-AF9, MLL-ELL, MLL-PTD, NPM1-MLF1, PML-RARA.

 

 

 

Významné interference:

Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v RNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod.