|
Popis vyšetření: Fúzní přestavba BCL2-IgH
Zařezeno v kategoriích: Synonyma:
B-CELL CLL/LYMPHOMA 2; t(14;18)(q32;q21)
Preanalytická fáze:
K vyšetření je třeba vzorek kostní dřeně nebo venózní krve (2-5 ml) odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA. Stabilita DNA v biologickém materiálu pro toto vyšetření je obvykle 72 hodin při teplotě 20-25 °C, 7 dní při teplotě 4-8 °C a 3 měsíce při teplotě -20 °C. Vyšetření se provádí z DNA extrahované z biologického materiálu manuálními nebo automatizovanými postupy. Nejčastěji jsou založené na práci s extrakčními mikrokolonkami, vysolení DNA či fenol/chloroformové extrakci. DNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování DNA se používá zamrazení vzorku DNA.
Poznámky k analytické metodě:
Cíl vyšetření: potvrzení fúzní přestavby pro diagnostiku a sledování minimální residuální choroby u pacientů s některými typy lymfomů. Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 151430 Soupravy jsou založené na real-time PCR pracující na principu hydrolyzačních sond. Reagencie pro izolaci a reverzní transkripci mohou a nemusejí být součástí soupravy. Příslušné sondy jsou obě značeny na 5´- konci stejným fluoroforem (např. FAM a JOE). Na 3´ konci sond je umístěn tzv. zhášeč (quencher). Při PCR je sonda hybridizována na příslušný DNA templát na základě komplementarity a poté hydrolyzována exonukleázovou aktivitou DNA polymerázy. Uvolněný fluorofor příslušného typu lze detekovat jako fluorescenční záření o specifické vlnové délce. Některé CE-IVD soupravy pro identifikační účely využívají principu dvoustupňové PCR reakce (tzv. nested PCR) s elektroforetickou koncovkou. Výhodou je velká citlivost, nevýhodou pracnost, časová náročnost, riziko kontaminace PCR produktem a nemožnost kvantifikace.
Významné interference:
Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v DNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod. |