beta thalassemia; -101 C>T, -87 C>G, -31 A>G, -30 T>A, -29 A>G, -28 A>G, CAP+1 A>C, init codon ATG>AGG, kodon 5 -CT, kodon 6 G>A (HbC), kodon 6 A>T (HbS), kodon 6 -A, kodon 8 -AA, kodon 8/9 +G, kodon 12 G>T, kodon 15 TGG>TAG, kodon 16 -C, kodon 17 A>T, kodon 19 A>G (Malay), kodon 22 7 bp del, kodon 26 G>A (HbE), kodon 27 G>T (Knossos), kodon 27/28 +C, kodon 30 G>C, kodon 36/37 -T, kodon 39 C>T, kodon 41/42 -TTCT, kodon 43 G>T, kodon 44 -C, kodon 71/72 +A, kodon 89/90 -GT, kodon 90 G>T, kodon 95 +A, 619 bp del, IVS 1.1 G>A, IVS 1.1 G>T, IVS 1.5 G>C, IVS 1.6 T>C, IVS 1.110 G>A, IVS 1.116 T>G, IVS 1.130 G>C, IVS 1-25 25 bp del, IVS 2.1 G>A, IVS 2.654 C>T, IVS 2.745 C>G, IVS 2.848 C>A.        

K vyšetření je třeba vzorek venózní krve (2-5 ml) odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA. Stabilita DNA v biologickém materiálu pro toto vyšetření je obvykle 72 hodin při teplotě 20-25 °C, 7 dní při teplotě 4-8 °C a 3 měsíce při teplotě -20 °C. 

Vyšetření se provádí z DNA extrahované z biologického materiálu manuálními nebo automatizovanými postupy. Nejčastěji jsou založené na práci s extrakčními mikrokolonkami, vysolení DNA či fenol/chloroformové extrakci. DNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování DNA se používá zamrazení vzorku DNA.

Cíl vyšetření: potvrzení či vyloučení mutací podmiňujících příznaky beta thalasémie

Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 613985

U CE-IVD souprav je často využíván přístup reverzně hybridizační.

Reverzní hybridizace: Před PCR je jeden z primerů na 5´- konci označen biotinem. Po amplifikaci je amplikon denaturován a přidán v roztoku k nitrocelulózové membráně (nejčastěji tvaru úzkého proužku o rozměrech několika centimetrů), na kterou byly výrobcem ukotveny jednořetězcové neznačené sondy jak pro zdravou sekvenci, tak pro vyšetřovanou mutaci. Při následné inkubaci dochází k hybridizaci a vyvázání DNA z roztoku na membránu. Po vymytí nespotřebované DNA je přidán komplex streptavidinu s enzymem (alkalická fosfatáza nebo peroxidáza). Při inkubaci se  na membráně ve specifických místech vytvoří "sendvič", který je složen z neznačené sondy, jednořetězce amplikonu s biotinem a s ním vázaný streptavidinový komplex s enzymem. Po vymytí nespotřebovaných reagencií se v poslední fázi přidává bezbarvý chromogen a reakcí s enzymem v přesně daném místě membrány dojde ke vzniku zbarvení. Membrána se nakonec opláchne demineralizovanou vodou a nechá vysušít. Proces může být manuální nebo automatický s dilutory, scannerem k hodnocením výsledku a možností přenosu obrázku a získaných dat do počítače.

CE-IVD souprava by vždy měla obsahovat kontrolní vzorky se známým genotypem. Ideální jsou soupravy obsahující kontroly s různými genotypy a kontrolu bez DNA templátu (demineralizovanou vodu).

Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v DNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod.