myeloproliferativní onemocnění, Jnus kinase 2 gene, V617F, G1849T

K vyšetření je třeba vzorek venózní krve (2-5 ml) odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA. Stabilita DNA v biologickém materiálu pro toto vyšetření je obvykle 72 hodin při teplotě 20-25 °C, 7 dní při teplotě 4-8 °C a 3 měsíce při teplotě -20 °C.

Vyšetření se provádí z DNA extrahované z biologického materiálu manuálními nebo automatizovanými postupy. Nejčastěji jsou založené na práci s extrakčními mikrokolonkami, vysolení DNA či fenol/chloroformové extrakci. DNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování DNA se používá zamrazení vzorku DNA.

Cíl vyšetření: vyšetření osob se suspektní myeloproliferativní nemocí a sledování minimální residuální choroby během léčby této choroby.    

Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 147796

Soupravy jsou založené na real-time PCR pracující na principu hydrolyzačních sond. Jde o kvalitativní či kvantitativní soupravy, v druhém případě by měly být vybaveny kalibračními standardy.  Počet kopií mutovaných alel se normalizuje vůči kopiím zdravého genu a vyjadřuje v procentech. 

Vyšetření se provádí ve dvou zkumavkách, proto jsou sondy pro mutovanou a zdravu alelu značeny na 5´- konci stejným fluoroforem (např. FAM a JOE). Na 3´ konci sond je umístěn tzv. zhášeč (quencher). Při PCR je sonda hybridizována na příslušný cDNA templát na základě komplementarity a poté hydrolyzována exonukleázovou aktivitou DNA polymerázy. Uvolněný fluorofor příslušného typu lze detekovat jako fluorescenční záření o specifické vlnové délce.  

Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v DNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod.