Popis vyšetření: Vyšetření metylace genu Septin9

Zařezeno v kategoriích:

Synonyma:

sept9

 

Preanalytická fáze:

K vyšetření se používá krevní plasma (3-4 ml) získané z nesrážlivé krve s EDTA. Plazma musí být oddělena do jedné hodiny po odběru. Z plazmy se následně izoluje DNA a provádí bisulfidická konverze nukleotidů s nemetylovaným cytosinem.

 

Poznámky k analytické metodě:

Cíl vyšetření: Vyšetření metylace v genu Septin9 u osob s podezřením na kolorektální karcinom.  

Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 604061

Při vyšetření CE-IVD soupravami se preferují založené na real-time PCR s hydrolyzačními sondami.    

Metoda real-time PCR s hydrolyzačními sondami: Reakční směsi pro real-time PCR obsahují specifické sondy. Ty jsou značeny na 5´- konci fluoroforem (např. FAM a JOE). Na 3´ konci sond je umístěn tzv. zhášeč (quencher). Při PCR je sonda hybridizována na příslušný DNA templát na základě komplementarity a poté hydrolyzována exonukleázovou aktivitou DNA polymerázy. Uvolněný fluorofor příslušného typu lze detekovat jako fluorescenční záření o specifické vlnové délce. Míra metylace podmiňuje pozitivní nebo negativní výsledek vyšetření. 

CE-IVD souprava by vždy měla obsahovat kontrolní vzorky s metylací a bez metylace. 

 

 

 

Významné interference:

Nejsou udávány. Pozitivní výsledek mohou dát také hyperproliferační stavy v GIT a plicích, falešně pozitivní výsledek byl pozorován také v těhotenství.