chronická myleloidní leukémie, resistence na imatinib mesylát, Abelson gene

K vyšetření je třeba vzorek venózní krve (10 ml) odebrané do vakuované plastové zkumavky s EDTA. Stabilita RNA v biologickém materiálu pro toto vyšetření je udávána do 24 hodin po odběru při teplotě 20-25 °C, materiál se nesmí zamrazovat! CE-IVD soupravy by měly být současně vhodné také pro vyšetření z kostní dřeně.  

Vyšetření se provádí z RNA extrahované z buněk bílé krevní řady manuálními nebo automatizovanými postupy. Nejčastěji jsou založené na práci s guanidiniovou solí (Trizol) a extrakčními mikrokolonkami. RNA se po izolaci charakterizuje spektrofotometricky, fluorimetricky nebo elektroforeticky. Pro dlouhodobější (déle než týdenní) uchování RNA se používá proces reverzní transktipce a tvorba cDNA. 

Cíl vyšetření: potvrzení přítomnosti mutace T315I v genu ABL u osob s chronickou myeloidní leukémií neodpovídajících na biologickou léčbou imanitib mesylátem (Glivecem).   

Přístup z OMIM katalogu (Online Mendelian Inheritance in Man): 189980

Soupravy založené na real-time PCR pracující na principu alelově specifické real-time PCR se sondami Scorpion. Jde o identifikační soupravy s citlivostí pod 1%. Pro práci je možno využívat dva různé fluorofory ke značení sond s nepřekrývajícími se emisními maximy, reakce pro wild-type alelu a alelu T315I lze uskutečnit v jedné PCR zkumace. Reagencie pro izolaci a reverzní transkripci nebývají součástí soupravy.

Řada aplikací využívá tradiční dideoxynukleotidové sekvenování kinázové domény genu ABL. Také zde je důležitá citlivost vyšetření, zpravidla se pohybuje okolo 10-15%. 

Popisovány jsou interference heparinu použitého jako antikoagulační činidlo, hemu při hemolytickém vzorku, residua organických rozpouštědel a solí v RNA extraktech, extrémně vysokých koncentrací dvojmocných kationtů. Výsledky nelze uzavřít v případě falešné negativity a falešné pozitivity výsledku PCR. Vyšetření nelze často provést z krve při aplastické anémii, imunosupresi před transplantací kostní dřeně, apod.